高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。
結(jié)構(gòu)及功能
HPLC儀一般由溶劑輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)(色譜柱)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)組成,具體包括儲(chǔ)液器、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀或數(shù)據(jù)工作站等幾部分 。其中輸液泵、色譜柱和檢測(cè)器是HPLC儀的關(guān)鍵部分 。
1. 溶劑輸送系統(tǒng)
儲(chǔ)液器:用來(lái)貯存數(shù)量足夠、符合要求的流動(dòng)相。配有溶劑過(guò)濾器,以防止流動(dòng)相中的顆粒進(jìn)入泵內(nèi)。
脫氣器:脫氣的目的是為了防止流動(dòng)相從色譜柱內(nèi)流出時(shí)釋放出氣泡進(jìn)入檢測(cè)器,從而引起噪聲,不能正常檢測(cè)。
輸液泵:將儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相連續(xù)不斷地以高壓形式進(jìn)入液路系統(tǒng),使樣品在色譜柱中完成分離過(guò)程。
梯度洗脫裝置:是在分離過(guò)程中通過(guò)逐漸改變流動(dòng)相的組成增加洗脫能力的一種裝置。
2. 進(jìn)樣系統(tǒng)
進(jìn)樣器:是將樣品送入色譜柱的裝置,進(jìn)樣方式可以分為兩種:閥進(jìn)樣或自動(dòng)進(jìn)樣。比較常用的是采用自動(dòng)進(jìn)樣器裝樣。
3. 分離系統(tǒng)
色譜柱:對(duì)樣品進(jìn)行分離,是整個(gè)色譜系統(tǒng)的心臟,它的質(zhì)量?jī)?yōu)劣直接影響到分離的效果。
4. 檢測(cè)系統(tǒng)
檢測(cè)器:將色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉(zhuǎn)變成易于測(cè)量的電信號(hào),被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收,得到樣品分離的色譜圖。
5. 數(shù)據(jù)處理和記錄系統(tǒng)
對(duì)色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,并參與HPLC儀器的自動(dòng)控制。